ABSTRACT
Abstract Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin-nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov- Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p<0.05). CEY was superior for progressive motility (p<0.05). The cryoprotective action of LDL was similar to TLDL for motility and kinetics, SMI, SV, and AM (p<0.05). Inclusion of PEY and T resulted in the lowest semen quality (p<0.05). The use of T resulted in a reduction in FMI and SMI (p<0.05). No differences in AM between treatments were found (p>0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination.
Resumen Antecedentes: la yema de huevo de gallina se agrega al semen bovino usado en inseminación artificial para protegerlo durante el proceso de criopreservación, aunque ésta tiene sustancias que pueden afectar el metabolismo espermatico y la calidad microbiológica del semen. Objetivo: evaluar la calidad post-descongelación del semen bovino criopreservado agregado con yema de huevo centrifugada y no centrifugada, lipoproteínas de baja densidad (LDL) y trehalosa (T). Métodos: diez eyaculados de cinco toros se criopreservaron bajo los tratamientos, T1: yema de huevo pura (PEY) al 20% v/v, T2: yema de huevo centrifugada (CEY) al 20% v/v, T3: LDL al 8% v/v, T4: T a 100 mM, y T5: T a 100 mM más LDL al 8% v/v (TLDL). La movilidad y la cinética espermática, la integridad funcional de la membrana (FMI), la integridad estructural de la membrana (SMI), la vitalidad espermática (SV) y la morfología anormal (AM), se determinaron mediante el sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), la prueba hipoosmótica (HOST), las sondas SYBR/PI y la tinción con eosina-nigrosina, respectivamente. Se utilizó un diseño completamente al azar. La normalidad de las variables se validó mediante la prueba de Kolmogórov-Smirnov. Se utilizó un modelo lineal generalizado para determinar las fuentes de variación. Las medias de los tratamientos se compararon mediante la prueba de Tukey. Resultados: CEY y LDL tuvieron un efecto similar en la protección de los espermatozoides, siendo superiores a los demás tratamientos respecto a movilidad, cinética e integridad de la membrana (p<0,05). CEY fue superior para la movilidad progresiva (p<0,05). La acción crioprotectora de LDL fue similar a TLDL para movilidad y cinética, SMI, AM y SV (p<0,05). PEY y T resultaron en la más baja calidad seminal (p<0,05). El uso de T redujo la FMI y la SMI (p<0,05). No se encontraron diferencias en AM entre los tratamientos (p>0,05). Conclusiones: la yema de huevo puede reemplazarse por yema de huevo centrifugada o por lipoproteinas de baja densidad en el diluyente de congelación usado para semen bovino destinado a inseminacion artificial.
Resumo Antecedentes: a gema de ovo de galinha tem sido utilizada com a finalidade de proteger o sêmen bovino durante o processo de criopreservação, embora tenha substâncias que possam afetar o metabolismo dos espermatozóides e a qualidade microbiológica do sêmen utilizado para a inseminação artificial. Objetivo: avaliar a qualidade pós-descongelamento do sêmen bovino criopreservado com gema de ovo centrifugada e não centrifugada, lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e trealose (T). Métodos: dez ejaculados de cinco touros foram criopreservados sob os tratamentos, T1: gema de ovo pura (PEY) 20% v/v, T2: gema de ovo centrifugada (CEY) 20% v/v, T3: LDL 8% v/v, T4: T 100 mM e T5: T 100 mM mais LDL 8% v/v (TLDL). Mobilidade e cinética espermática, integridade funcional da membrana (FMI), integridade estrutural da membrana (SMI), vitalidade espermática (SV) e morfologia anormal (AM) foram determinadas por o sistema Sperm Class Analyzer (SCA®), teste hiposmótico (HOST), coloração com SYBR/PI e eosina-nigrosina, respectivamente. Um design completamente aleatoriedade foi usado. A normalidade das variáveis foi validada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Um modelo linear generalizado foi utilizado para determinar as fontes de variação. As médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Tukey. Resultados: T2 (CEY) e T3 (LDL) tiveram efeito similar na proteção espermática, sendo superior aos demais tratamentos para mobilidade, cinética e integridade da membrana (p<0,05). T2 (CEY) foi superior para mobilidade progressiva (p<0,05). A ação crioprotetora de T3 (LDL) foi semelhante à T5 (TLDL) para motilidade e cinética, SMI, SV e AM (p<0,05). T1 (PEY) e T4 (T) tiveram a menor qualidade seminal (p<0,05). O uso de T4 (T) produziu uma redução na SMI e FMI (p<0,05). Não foram encontradas diferenças na AM entre os tratamentos (p>0,05). Conclusões: a gema de ovo pode ser substituída por gema de ovo centrifugada ou lipoproteínas de baixa densidade no diluente de congelamento de sêmen bovino.
ABSTRACT
Resumen Objetivo: Evaluar la eficacia de la asociación cloruro de isometamidium+clorhidrato de oxitetraciclina (Isopan® Laboratorio Reveex de Venezuela) en el control de infecciones por Tripanosoma vivax y Anaplasma marginale en bovinos. Materiales y métodos: Doce bovinos de aproximadamente un año de edad fueron asignados al azar, a dos grupos de seis animales cada uno. Un grupo fue inoculado por vía venosa con 10 mL de sangre con una parasitemia de 3,5% de Ana- plasma marginale en extendido sanguíneo coloreado; el segundo grupo se inoculó, por la misma vía, con cinco mL de sangre de una cepa de campo de Trypanosoma vivax con una parasitemia de tres flagelados por campo en un frotis sanguíneo delgado coloreado. En todas las terneras, la temperatura rectal, el hematocrito y la parasitemia fueron registrados con frecuencia diaria o inter-diaria hasta los días 49 posinoculación y 27 postratamiento en el caso de A. marginale y hasta los días 11 posinoculación y 21 postratamiento en el caso de T. vivax. Resultados: La asociación oxitetraciclina-isometamidium fue 100% eficaz contra Trypanosoma vivax desde un día después de su aplicación y por el término de 29 días experimentales. La asociación tuvo una eficacia promedio contra Anaplasma marginale de 75,59% aunque cuatro de las terneras requirieron un segundo tratamiento contra Anaplasma entre los días 10 y 27 después del tratamiento. Conclusiones: La asociación oxitetraciclina - isometamidium mostró una eficacia de 100% contra Trypanosoma vivax y de 75,59% en promedio, contra Anaplasma marginale, aunque no previno un nuevo episodio de anaplasmosis entre los días 10 y 27 después del tratamiento.
Abstract Objective: To evaluate the efficacy of the association Isometamidium Chloride + Oxytetracycline Hydrochloride (Isopan® Reveex Laboratories, Venezuela) on the control of infections by Trypanosoma vivax and Anaplasma marginale in bovine. Materials and methods: Twelve one-year old heifers were randomly assigned to two groups of six animals each. Heifers on one group were each inoculated intravenously with 10 mL of blood showing a 3.5% parasitemia with Anaplasma marginale on stained blood smears. Heifers in the other group were inoculated intravenously with five mL of blood containing a field strain of T. vivax with a parasitemia of 3 flagellates per microscopic field in a stained blood smear. In all heifers, rectal temperature, haematocrit and parasitemia were monitored daily or every other day until days 49 post inoculation and 27 post treatment in the case of A. marginale and 11 post inoculation and 21 post treatment in the case of T. vivax. Results: The association oxitetracicline-isometamidium was 100% efficacious against T. vivax from day one after administration and until the 21th experimental day. The association showed an average efficacy of 75.59% against A. marginale, though four heifers required a second treatment against Anaplasma between days 10 and 27 after treatment. Conclusions: The association Oxitetracicline - isometamidium showed a 100% efficacy against T. vivax and an average of 75.59% efficacy against A. marginale but did not prevent a second anaplasmosis episode between days 10 and 27 following the first treatment.
Resumo Objetivo: Avaliar a eficácia da associação cloreto de isometamidio + cloridrato de oxitetraciclina (Isopan® Laboratorio Reveex de Venezuela) no controle de infecções por Trypanosoma vivax e Anaplasma marginale em bovinos. Materiais e métodos: Doze bovinos de aproximadamente 1 ano de idade foram distribuídos aleatoria- mente em dois grupos de 6 animais cada. Um grupo foi inoculado por via venosa com 10 mL de sangue com parasitemia de Anaplasma marginale de 3,5% em esfregaço de sangue corado; o segundo grupo foi inoculado, pela mesma via, com cinco mL de sangue de uma cepa de Trypanosoma vivax com parasitemia de três flagelados por campo em esfregaço de cor fina. Em todos os bezerros, temperatura retal, hematócrito e parasitemia foram registrados diariamente ou inter-diariamente até os dias 49 pós-inoculação e 27 pós-tratamento no caso de A. marginale e até os dias 11 pós-inoculação e 21 pós-tratamento no caso de A. de T. vivax. Resultados: A associação oxitetraciclina-isometamídio foi 100% eficaz contra o Trypanosoma vivax um dia após sua aplicação e pelo prazo de 29 dias experimentais. A associação teve uma eficácia média contra o Anaplasma marginale de 75,59%, embora quatro dos bezerros precisassem de um segundo tratamento contra o Anaplasma entre os dias 10 e 27 após o tratamento. Conclusões: A associação oxitetraciclina-isometamídio mostrou eficácia de 100% contra Trypanosoma vivax e 75,59% em média contra Anaplasma marginale, embora não tenha prevenido novo episódio de anaplasmose entre os dias 10 e 27 após o tratamento.